摘要：建立一种检测人血清中N端前脑钠肽含量的双抗体夹心ELISA方法。采用配对人N端前脑钠肽抗体,通过对其包被条件与封闭条件、包被与酶标抗体工作浓度、反应模式、线性范围、批内批间精密性、回收率、干扰因子试验、临床标本检测等研究,建立人N端前脑钠肽ELISA定量检测方法并评价其性能。实验确定了最适包被抗体稀释用缓冲液为0.05mol/L pH9.6CB,温度及时间为4℃18h;最适封闭液为0.6%BSA,温度及时间为4℃18h;包被抗体最适浓度为4μg/ml,酶标抗体最佳浓度为1∶3000;最佳反应模式为37℃样本孵育30min,酶标二抗孵育30min,显色20min的两步法反应模式。性能评价显示建立的检测方法线性范围为50500pg/ml,批内及批间精密度分别为2.3%和3.4%。高、中、低值回收率分别为101.2%、97.2%、93.7%。干扰因子试验结果显示黄疸、脂血及低浓度溶血对试验结果无较大影响,但标本随溶血程度的增加其影响程度也增大。共做了248份临床血清,200份用来评价试剂盒的临床使用性能,结果显示总体符合率为96.9%,说明可用于临床心衰患者的检测;同时与国外试剂盒对比检测48份临床血清,结果显示两者相关性较好,回归方程:Y=0.8017X+188.3,R2=0.9027。初步建立了一种检测人血清中N端前脑钠肽含量的ELISA方法,该方法具有较高的准确性和精密度。

关键词：

人N端前脑钠肽;ELISA;定量检测;

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